QIAGEN RNeasy Kits의 기본 원리
- QIAGEN의 RNeasy Kit는 선택적인 결합력을 가지는 silica gel membrane, 특화된 buffer 시스템, spin column이 조화된 RNA 정제 Kit입니다.
- RNeasy Kits를 이용한 RNA 정제는 lysis, bind, wash, elute 의 간단한 4단계로 구성되어 있으며, lysis 이후의 모든 과정은 microcentrifuge를 이용한 원심분리를 통해 진행됩니다.
* Column 별도 구매 불가.
Lysis
먼저 sample에 guanidine-thiocyanate가 포함된 high-salt lysis buffer (chaotropic agent)를 처리합니다. 이 과정 동안 sample은 완전히 lysis 되는데, 이 때 sample 내 RNase는 guanidine salt에 의해 활성이 억제됩니다.
Bind
Lysate에 ethanol을 첨가한 다음, RNeasy Mini Spin Column에 옮깁니다. Chaotropic agent와 ethanol에 의해 silica gel membrane에 선택적인 binding 조건이 만들어집니다. 즉, 200 nucleotides 이상의 total RNA만 membrane에 결합하게 됩니다.(최대 binding capacity: 100 ug)
Wash
Total RNA는 membrane에 결합되지만, 다당류 (polysaccharides), 단백질, 기타 물질들은 membrane에 결합하지 못합니다. 이들은 washing 단계를 통해 효과적으로 제거됩니다.
Elute
Silica gel membrane 에 결합되어 있던 순수한 total RNA는 추가적으로 농축할 필요 없이 바로 사용할 수 있도록 적은 volume (30-100 ul) 으로 water에 elution 됩니다. RNeasy procedure를 이용하면 30분 이내에 200 nt 이상의 RNA molecule만을 손쉽게 정제할 수 있습니다. 200 nt 미만의 RNA (5.8S rRNA, 5S rRNA, tRNA, etc) 는 전체 RNA의 15-20%를 차지하고 있기 때문에, 이러한 선택적인 정제는 연구에 주로 이용되는 mRNA의 비율을 증가시켜 줍니다. (만일 small RNA의 정제가 필요할 경우, QIAGEN의 small RNA 전용 제품을 사용할 수 있습니다.)
정제된 RNA는 다양한 application에 적용할 수 있습니다.
| ∙ RT-PCR and real-time PCR | ∙ Differential display | ∙ cDNA synthesis |
| ∙ Northern, dot, and slot blot analysis | ∙ Primer extension | ∙ Poly A+ RNA selection |
| ∙ RNase/S1 nuclease protection | ∙ Microarrays | ∙ RNA-Seq |
*제품문의 T. 031-728-3239, E. technical@dawinbiotech.com
#QIAGEN #다윈바이오 #RNA #RNeasy #miRNA #Exosomal_RNA #Viral_RNA
QIAGEN RNeasy Kits의 기본 원리
- QIAGEN의 RNeasy Kit는 선택적인 결합력을 가지는 silica gel membrane, 특화된 buffer 시스템, spin column이 조화된 RNA 정제 Kit입니다.
- RNeasy Kits를 이용한 RNA 정제는 lysis, bind, wash, elute 의 간단한 4단계로 구성되어 있으며, lysis 이후의 모든 과정은 microcentrifuge를 이용한 원심분리를 통해 진행됩니다.
* Column 별도 구매 불가.
Lysis
먼저 sample에 guanidine-thiocyanate가 포함된 high-salt lysis buffer (chaotropic agent)를 처리합니다. 이 과정 동안 sample은 완전히 lysis 되는데, 이 때 sample 내 RNase는 guanidine salt에 의해 활성이 억제됩니다.
Bind
Lysate에 ethanol을 첨가한 다음, RNeasy Mini Spin Column에 옮깁니다. Chaotropic agent와 ethanol에 의해 silica gel membrane에 선택적인 binding 조건이 만들어집니다. 즉, 200 nucleotides 이상의 total RNA만 membrane에 결합하게 됩니다.(최대 binding capacity: 100 ug)
Wash
Total RNA는 membrane에 결합되지만, 다당류 (polysaccharides), 단백질, 기타 물질들은 membrane에 결합하지 못합니다. 이들은 washing 단계를 통해 효과적으로 제거됩니다.
Elute
Silica gel membrane 에 결합되어 있던 순수한 total RNA는 추가적으로 농축할 필요 없이 바로 사용할 수 있도록 적은 volume (30-100 ul) 으로 water에 elution 됩니다. RNeasy procedure를 이용하면 30분 이내에 200 nt 이상의 RNA molecule만을 손쉽게 정제할 수 있습니다. 200 nt 미만의 RNA (5.8S rRNA, 5S rRNA, tRNA, etc) 는 전체 RNA의 15-20%를 차지하고 있기 때문에, 이러한 선택적인 정제는 연구에 주로 이용되는 mRNA의 비율을 증가시켜 줍니다. (만일 small RNA의 정제가 필요할 경우, QIAGEN의 small RNA 전용 제품을 사용할 수 있습니다.)
정제된 RNA는 다양한 application에 적용할 수 있습니다.
*제품문의 T. 031-728-3239, E. technical@dawinbiotech.com
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