NGSQIAGEN의 DNA methylation workflow를 소개합니다!

조회수 7499

1371b818bbe9c.jpg


DNA methylation 실험을 QIAGEN이 도와드립니다

57a41ceb2c3c6.jpg

     DNA methylation는 Guanine 앞 Cytosine의 5번 탄소에 methyl group이 첨가될 때 DNA methyltransferases에 의해 촉매되는 반응입니다.
진핵 생물에서 DNA methylation은 DNA 합성 후 일어납니다.
DNA에 존재하는 CpGs의 6-70%가 메틸화되어 있으며, CpG가 아닌 부위에서도 발견됩니다.
     DNA methylation은 DNA의 염기서열이 유지되면서 유전기능이 변화되고 자손까지 전달되는 후생유전학의 대표기전입니다.



QIAGEN은 다음과 같은 DNA methylation workflow를 보유하고 있습니다.

c5ea0eebc505c.png

            - 단 1 - 10 ng의 DNA 사용으로 조직, FFPE 및 Biofluid의 고성능 분석이 가능합니다.

            - 하루 만에 DNA 추출부터 데이터 분석까지 가능합니다.

            - 프로젝트에 맞게 패널을 맞춤화하거나 설계할 수 있는 유연성이 있습니다.


1. Bisulfite Treatment Kit - Unmethyl cytocine을 uracil로 99%이상 전환 가능합니다!

Cat no.
ProductSize
Description
59104
48 rxn Template 2 ug까지 99% 이상 conversion 가능
Column 당 30 mg의 highly pure 6xHis-tagged protein 분리 정제 가능
59110EpiTect 96 Bisulfite Kit*2 rxn
59124EpiTect Plus DNA Bisulfite Kit48 rxn 고농도의 converted DNA를 elution volume 10 ul 내로 확보 가능
59824EpiTect Fast DNA Kit50 rxn 
Cytosine conversion rate가 99% 이상
30분 이내 빠른 결과 확인
DNA protects 기술로 DNA degradation 방지
59826200 rxn 
59720EpiTect Fast 96 DNA Kit*2 rxn 
59844EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit50 rxn FFPE tissue로부터 DNA 추출에 최적화된 프로토콜
59740EpiTect Fast 96 FFPE Bisulfite Kit*2 rxn 
59864EpiTect Fast LyseAll Bisulfite Kit50 rxn Whole blood, cultured cell, tissue에서 DNA 추출과
Bisulfite conversion을 하나의 Kit로 수행 가능
59866200 rxn 
59203EpiTect Whole Bisulfite Kit

25 rxn Conversion된 DNA를 충분한 양으로 증폭

*96 well plate rotor 또는 [19504]QIAvac 96 필요

7b9ac1d1f8872.jpg

EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit를 이용해 K562 genomic DNA에 bisulfite 처리한 결과입니다. 총 1,252개의 cytosine을 분석하였을 때 99% 이상 cytosine conversion이 되는 것을 확인할 수 있습니다.

6e05ecd82cf2b.jpg

EpiTect Fast Bisulfite Kit를 이용하여 bisulfite conversion을 하실 경우 타사 제품에 비하여 fragmentation이 낮게 발생하는 것을 확인할 수 있습니다. 또한, 6 kb 이상 converted DNA도 확인이 가능합니다.



2. Analysis Kit - Conversion된 DNA를 RT-PCR로 분석해 보세요!

Cat no.ProductSizeDescription
59496EpiTect MethylLight PCR + Rox Vial Kit200 rxnMethylLight assay를 통한 신뢰성있는 methylation 정량
59695EpiTect PCR control DNA set100 rxnMethylation 분석을 위한 control 실험에 사용


e739fe60c7581.jpg


MethyLight 작동 원리
1. Methylation된 부위에 Primer가 부착됩니다 (A).
2. PCR의 extension 과정에서 fluorophore가 방출됩니다.

Unmethylated 부위에는 primer 부착이나 PCR의 extension 과정이 발생하지 않아 fluorescence를 확인할 수 없습니다.

MethyLight Kit를 이용하여 methylation을 쉽게 정량하실 수 있습니다.


3. NGS - 준비한 샘플을 이용해 DNA methylation을 분석해 보세요!

Cat no.
Product
Size
Description
180502QIAseq Methyl Library Kit24 rxn빠르고 정확하게 시퀀스 편향없는 WGBS library를 구축 가능
335501QIAseq Targeted Methyl Panel*8 rxn Genome 전체에서 영역을 감지 가능
Single-primer extension을 적용해 민감하고 구체적 솔루션 제공
33551196 rxn 
335602QIAseq Targeted Methyl Custom Panel*96 rxn 샘플에 대한 custom panel을 이용해 targeted methylation 시퀀싱 가능
335603386 rxn 
335580QIAseq Methyl DNA 8-Index I8 rxn 학술 문의
335591QIAseq Methyl 96 Index Set A96 - 386 rxn학술 문의
335592QIAseq Methyl 96 Index Set B96 - 386 rxn학술 문의
335593QIAseq Methyl 96 Index Set C96 - 386 rxn학술 문의
QIAseq Methyl 96 Index Set D96 - 386 rxn학술 문의

* 해당 제품의 경우 홈페이지에서 별도제작 과정이 필요합니다

eaca5222d86ff.jpg

Jrkat cell에 bisulfite 처리된 DNA를 QIAseq Methyl Library Kit를 이용하여 library구축 결과입니다. 최소 100 pg library 구축이 가능하며, 높은 mapping rate를 확인할 수 있습니다.

a4a0feefb5471.jpg

FFPE DNA를 이용해 MGMT 유전자의 CpG 7곳의 methylation을 분석한 결과입니다. QIAseq Targeted Methyl Panel을 이용하여 CpG methylation을 분석한 결과 이전 검증된 Pyrosequencing 결과와 높은 상관관계를 보입니다.


*제품문의  T. 031-728-3239,  E. technical@dawinbiotech.com

#QIAGEN #다윈바이오 #Bisulfite #EpiTect #QIAseq #Methylation


TOP