HRP와 IgG 항체를 간단하고 빠르게 conjugation 시킬 수 있는 제품을 소개합니다. (For research use only)
1. 제품의 특징
1. HRP conjugation kit (ab102890)는 1차 아민 그룹(ex: 라이신)을 표적으로 하여 HRP로 항체를 공유결합으로 라벨링하여 간단하고 빠르게 실험하실 수 있습니다.
2. Hands on time은 단 30초이며, 항체 손실 없이 3시간 30분 이내에 conjugation 된 항체를 준비할 수 있습니다.
3. 항체를 conjugation 하기 위해서는 적절한 buffer와 정제된 항체가 필요합니다. (아래표에서 확인 가능합니다.)
4. abcam은 항체 라벨링에 적합한 많은 종류의 carrier free 항체를 제공합니다. Conjugation을 바로 할 수 있는 abcam의 항체는 BSA, sodium azide, glycerol 이 들어있지 않은 정제된 항체이며 최적농도 1 mg/ml로 공급됩니다.
Carrier free 안티바디 자세히 알아보기
Conjugation 하려는 항체가 호환되지 않는 버퍼로 제공되는 경우 abcam의 항체 정제 kit 및 농축 kit를 사용하여 적절한 농도와 버퍼로 만들 수 있습니다.
Purification & Conjugation kit 알아보기
2. 제품은 사이즈별로 다양하게 판매되고 있습니다.
| Item | 3 x 10 µg | 100 µg | 3 x 100 µg | 1 mg | 5 x 1 mg | 5 mg |
| HRP mix | 3 vials | 1 vial | 3 vials | 1 vial | 5 vials | 1 vial |
| Modifier reagent | 1 vial | 1 vial | 1 vial | 1 vial | 1 vial | 1 vial |
| Quencher reagent | 1 vial | 1 vial | 1 vial | 1 vial | 1 vial | 1 vial |
3. Conjugation시 고려야해 하는 항체의 버퍼
호환되는 버퍼 및 항체
| Purified antibody | Yes |
| Antibody concentration | 0.5-4 mg/mL |
| 50mM / 0.6% Tris1 | Yes |
| pH | 6.5-8.5 |
| Amine free buffer (e.g. MES, MOPS, HEPES, PBS) | Yes |
| Potassium phosphate | Yes |
| Non-buffering salts (e.g. sodium chloride) | Yes |
| 0.1% BSA | Yes |
| Chelating agents (e.g. EDTA) | Yes |
| 50% Glycerol | Yes |
| 0.1% sodium azide2 | Yes |
| Sodium chloride | Yes |
| Sodium citrate | Yes |
| EDTA | Yes |
| Trehalose | Yes |
| Sugars | Yes |
| Gelatin | <0.1% |
| Borate buffer | Yes |
1 Tris buffered saline is almost always ≤ 50 mM / 0.6%
2 Sodium azide irreversibly inhibits HRP; antibodies with azide should be purified before using the HRP conjugation kit.
호환되지 않는 버퍼 및 항체
| Antibody in ascites fluid, serum, hybridoma or tissue culture media | No |
| Thiomerosal | No |
| Proclin | No |
| Glycine | No |
| Arginine | No |
| Glutathione | No |
| DTT | No |
| Merthiolate | No |
| Sodium Azide | No |
4. Conjugation 시 필요한 항체의 양과 볼륨
| Vial Size | Lowest Amount of Antibody | Recommended Amount of Antibody
(1:4 Antibody:HRP) | Maximum Amount of Antibody
(1:1 Antibody:HRP)
| Fixed Volume of Antibody |
| 10 ug | Down to 5 µg at 0.5 mg/mL | Optimally 10 µg at 1 mg/mL | Up to 40 µg at 4 mg/mL | Fixed 10 µL |
| 100 ug | Down to 50 µg at 0.5 mg/mL | Optimally 100 µg at 1 mg/mL | Up to 400 µg at 4 mg/mL | Fixed 100 µL |
| 1 mg | Down to 500 µg at 0.5 mg/mL | Optimally 1,000 µg at 1 mg/mL | Up to 4,000 µg at 4 mg/mL | Fixed 1,000 µL |
| 5 mg | Down to 2500 µg at 0.5 mg/mL | Optimally 5,000 µg at 1 mg/mL | Up to 20,,000 µg at 4 mg/mL | Fixed 5,000 µL |
- 표시된 고정 볼륨을 사용하는 것이 중요합니다. 반응 부피를 수정하면 conjugated 항체의 품질이 저하될 수 있습니다.
- 항체는 milli-Q 물이나 PBS를 사용하여 희석할 수 있습니다.
- 최적의 conjugated 항체는 일반적으로 권장되는 양의 항체를 사용하여 생성되지만 제공된 범위 내에서 다른 양의 항체를 사용하여도 conjugation이 가능합니다.
- 권장량보다 적은 양의 항체를 추가하면 conjugation 후 label이 결합되지 않을 수 있습니다. 이 분리된 label은 quencher에 의해 비활성화되고 하고자 하는 실험(application)의 첫 번째 세척 단계에서 제거됩니다.
5. 실험 Protocol
사용하기 전에 모든 재료와 준비된 시약을 실온으로 Equilibration 합니다.
1. 항체의 10 μL에 1 μL의 Modifier reagent을 추가하고 부드럽게 섞습니다.
2. HRP Conjugation Mix 바이알에서 캡을 제거하고 항체 샘플(Modifier 시약이 추가된)을 동결건조된 물질에 직접 파이펫으로 옮깁니다. 파이펫을 사용하여 액체를 한 번 또는 두 번 부드럽게 섞어줍니다.
3. 바이알의 캡을 닫고, 실온(20-25°C)의 dark room에서 3시간 동안 그대로 두십시오. Overnight과 같은 더 긴 incubation도 가능합니다.
4. 3시간(또는 그 이상) 동안 incubation한 후, 사용된 항체 10 μL마다 1 μL의 Quencher 시약을 추가하고 부드럽게 섞습니다. Conjugation된 항체는 30분 후에 사용할 수 있습니다. 별도의 정제가 필요하지 않습니다.
** Abcam홈페이지에 가서 제품 살펴보기 클릭
제품 문의 Tel. 031-728-3233, 3237 E-mail. technical@dawinbio.com 카카오톡 플러스친구 ID: abcam
HRP와 IgG 항체를 간단하고 빠르게 conjugation 시킬 수 있는 제품을 소개합니다. (For research use only)
1. 제품의 특징
1. HRP conjugation kit (ab102890)는 1차 아민 그룹(ex: 라이신)을 표적으로 하여 HRP로 항체를 공유결합으로 라벨링하여 간단하고 빠르게 실험하실 수 있습니다.
2. Hands on time은 단 30초이며, 항체 손실 없이 3시간 30분 이내에 conjugation 된 항체를 준비할 수 있습니다.
3. 항체를 conjugation 하기 위해서는 적절한 buffer와 정제된 항체가 필요합니다. (아래표에서 확인 가능합니다.)
4. abcam은 항체 라벨링에 적합한 많은 종류의 carrier free 항체를 제공합니다. Conjugation을 바로 할 수 있는 abcam의 항체는 BSA, sodium azide, glycerol 이 들어있지 않은 정제된 항체이며 최적농도 1 mg/ml로 공급됩니다.
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Conjugation 하려는 항체가 호환되지 않는 버퍼로 제공되는 경우 abcam의 항체 정제 kit 및 농축 kit를 사용하여 적절한 농도와 버퍼로 만들 수 있습니다.
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2. 제품은 사이즈별로 다양하게 판매되고 있습니다.
3. Conjugation시 고려야해 하는 항체의 버퍼
호환되는 버퍼 및 항체
1 Tris buffered saline is almost always ≤ 50 mM / 0.6%
2 Sodium azide irreversibly inhibits HRP; antibodies with azide should be purified before using the HRP conjugation kit.
호환되지 않는 버퍼 및 항체
4. Conjugation 시 필요한 항체의 양과 볼륨
(1:4 Antibody:HRP)
(1:1 Antibody:HRP)
- 표시된 고정 볼륨을 사용하는 것이 중요합니다. 반응 부피를 수정하면 conjugated 항체의 품질이 저하될 수 있습니다.
- 항체는 milli-Q 물이나 PBS를 사용하여 희석할 수 있습니다.
- 최적의 conjugated 항체는 일반적으로 권장되는 양의 항체를 사용하여 생성되지만 제공된 범위 내에서 다른 양의 항체를 사용하여도 conjugation이 가능합니다.
- 권장량보다 적은 양의 항체를 추가하면 conjugation 후 label이 결합되지 않을 수 있습니다. 이 분리된 label은 quencher에 의해 비활성화되고 하고자 하는 실험(application)의 첫 번째 세척 단계에서 제거됩니다.
5. 실험 Protocol
사용하기 전에 모든 재료와 준비된 시약을 실온으로 Equilibration 합니다.
1. 항체의 10 μL에 1 μL의 Modifier reagent을 추가하고 부드럽게 섞습니다.
2. HRP Conjugation Mix 바이알에서 캡을 제거하고 항체 샘플(Modifier 시약이 추가된)을 동결건조된 물질에 직접 파이펫으로 옮깁니다. 파이펫을 사용하여 액체를 한 번 또는 두 번 부드럽게 섞어줍니다.
3. 바이알의 캡을 닫고, 실온(20-25°C)의 dark room에서 3시간 동안 그대로 두십시오. Overnight과 같은 더 긴 incubation도 가능합니다.
4. 3시간(또는 그 이상) 동안 incubation한 후, 사용된 항체 10 μL마다 1 μL의 Quencher 시약을 추가하고 부드럽게 섞습니다. Conjugation된 항체는 30분 후에 사용할 수 있습니다. 별도의 정제가 필요하지 않습니다.
** Abcam홈페이지에 가서 제품 살펴보기 클릭
제품 문의 Tel. 031-728-3233, 3237 E-mail. technical@dawinbio.com 카카오톡 플러스친구 ID: abcam