[VectorBuilder]Stable Cell Line 제작도 VectorBuilder와 함께해 보세요!

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원하는 유전자를 KO, KI은 물론 Overexpression, KD까지 가능한

Stable Cell Line 제작 서비스를 제공합니다!




VectorBuilder 제공 서비스


1) Gene Knockin

  - 원하는 게놈 타겟 부위에 GOI를 knockin한 안정적인 세포주를 제작할 수 있습니다.

  - 타겟 부의 특이적 gRNA/Cas9 RNP complex와 HDR (homology=directed repair)을 위한 donor vector가 함께 타겟 세포로 도입됩니다.

  - VectorBuilder의 독자적인 donor 디자인 및 유전자 전달 방법을 통해 세포 대부분은 3-50%의 HDR 비율이 나타납니다.

  - Genotyping PCR, Sanger sequencing으로 QC가 진행됩니다.


2) Gene Knockout

  - GOI를 영구적으로 knockout시킨 안정적인 세포주를 제작할 수 있습니다. 

  - GOI를 타겟으로 하는 단일 gRNA 또는 한쌍의 gRNA를 Cas9와 함께 세포에 도입하여 DSB (double strand breaks)를 생성합니다. 

  - PCR, Sanger sequencing으로 QC가 진행됩니다.

  - KO은 아래와 같이 두가지 서비스 중 선택 가능합니다.

     -> Frameshift mutation: single gRNA+Cas9 이용. DSB 생성 후 NHEJ에 의해 insertion 또는 deletion으로 인해 frameshift가 발생합니다.

     -> Deletion mutation: double gRNA+Cas9 이용. 각각의 single strand를 양쪽에서 잘라주어, 타겟부위를 더 정확하게 editing하여 off-target이 감소됩니다.


3) Point Mutation

  - 게놈 타겟 사이트에 원하는 point mutation이 있는 안정적인 세포주를 제작할 수 있습니다. 

  -  HDR을 위한 point mutation 주형을 운반하는 donor vector와 함께 타겟 사이트 특이적 gRNA/Cas9 RNP complex가 표적 세포에 도입됩니다.

  - PCR, Sanger sequencing으로 QC가 진행됩니다.


4) Gene Overexpression

  - GOI를 안정적으로 과발현하도록 세포주를 제작할 수 있습니다.

  - 렌티바이러스 transduction 이후에 antibiotic selection에 의해 생성됩니다.

  - RT-qPCR을 통해 overexpression validaiton이 진행됩니다.

  - Mixed pool 또는 Two single clone으로 서비스를 선택할 수 있습니다.


5) Gene Knockdown

  - GOI의 장기간 억제가 필요한 응용 분야를 위해 shRNA knockdown 안정 세포주를 제작할 수 있습니다. 

  - 효율적인 knockdown을 보장하기 위해 GOI를 타겟으로 디자인한 3개의 shRNA 중 하나를 운반하는 렌티바이러스로 표적 세포를 각각 개별적으로 transduction합니다.

  - RT-qPCR을 통해 검증된 최고의 knockdown 효율을 보이는 세포주가 제공됩니다. 

  - Mixed pool 또는 Two single clone으로 서비스를 선택할 수 있습니다.


6) Tet Inducible Gene Expression

   - Background 발현을 최소화하고 GOI를 높은 유도발현으로 Tet inducible 유전자 발현 안정 세포주를 맞춤형으로 제작할 수 있습니다. 

   - Tet regulatory 단백질(예: rtTA, tTS/rtTA, tet3G 등)을 발현하는 안정적인 세포주를 디자인할 수 있습니다.

   - Tet inducible 유전자 발현을 위해 TRE에 의해 구동되는 GOI를 운반하는 바이러스/플라스미드로 transduction/transfection 될 수 있습니다.

   - Tet-On 세포주의 경우 GOI 유도는 RT-qPCR에 의해 검증됩니다.

   - Mixed pool 또는 Two single clone으로 서비스를 선택할 수 있습니다. 



Stable Cell Line 제작 과정




* 제품문의  T. 031-728-3239,  E. technical@dawinbiotech.com


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