Western blotPuredown Protein A, G, A/G Agarose

2018-07-13
조회수 11185


Antibody isotype에 맞는 agarose를 선택하세요! 

           

Puredown Protein A, G, A/G Agarose


  • BSA blocking 처리로 non-specific binding 최소화
  • Binding capacity가 높고 효율 대비 경제적인 제품
  • 별도의 전처리 과정 없이 바로 사용 가능


IP (Immunoprecipitation) 프로토콜

Sample pre-clearing (Optional)

1. Lysate 또는 media에 1차 antibody의 host species에 맞는 control IgG (~1.0 ug) 와 10 ul의 Puredown Protein Agarose를 넣고 4℃에서 1시간 incubation 한다. 

2. 4℃에서 15분 간 2,500 rpm으로 centrifugation 한다.

3. 상등액을 새로운 15 ml conical centrifuge tube에 옮긴다. (ice에서 수행)

4. 상등액 내의 total protein 양을 정량한다.


IP (Immunoprecipitation)

1. 1.5 ml tube에 1 mg의 total protein과 1 ug의 정제된 1차 antibody를 넣고 4℃에서 1시간 incubation 한다. (1차 antibody의 농도는 실험에 맞게 조절)

2. 10 ul의 Puredown Protein Agarose를 넣는다.

3. 1.5 ml tube를 rotating 장비를 이용하여 4℃에서 1시간~overnight 까지 incubation 한다.

4. 4℃에서 15분 간 2,500 rpm으로 centrifugation 한 다음, 조심스럽게 상등액을 버린다.

5. 1 ml의 ice-cold cell lysis buffer 또는 PBS로 pellet을 washing 한다. 4-5 과정을 3번 더 반복한다.

6. 마지막 washing 후에, pellet을 Laemmli sample buffer에 resuspension 시킨 후 5분 간 끓인다. (사용하지 않는 sample은 냉동 보관)

7. 4℃에서 15분 간 2,500 rpm으로 centrifugation 한다.

8. 상등액을 이용하여 SDS-PAGE와 Immunoblot analysis를 진행한다.


Protein Agarose 선택 가이드

SpeciesIsotypeProtein AProtein GSpeciesIsotypeProtein AProtein G
HumanIgG1++++++ChickenAll isotypes-++
IgG2++++++CowAll isotypes+++++
IgG3-+++GoatAll isotypes-++
IgG4++++++Guinea PigAll isotypes+++++
IgMUse anti-Human IgMHamsterAll isotypes+++
IgE-+HorseAll isotypes+++++
IgA-+PigAll isotypes+++
MouseIgG1++++RabbitAll isotypes+++++
IgG2a++++++SheepAll isotypes-++
IgG2b++++



IgG3++



IgMUse anti-Human IgM



RatIgG1-+



IgG2a-+++



IgG2b-++



IgG2c+++





Ordering information

ProductBinding capacityCat. No.Size
국내 재고
Puredown Protein A-Agarose, BSA Blocked> 35 mg/ml Human IgGP9201-0151.5 ml
P9201-0505 ml
P9201-10010 ml
P9201-20020 ml
P9201-40040 ml
Puredown Protein G-Agarose, BSA Blocked> 18 mg/ml Human IgGP9202-0151.5 ml
P9202-0505 ml
P9202-10010 ml
P9202-20020 ml
P9202-40040 ml
Puredown Protein A/G-Agarose, BSA Blocked> 18-35 mg/ml Human IgGP9203-0151.5 ml
P9203-0505 ml
P9203-10010 ml
P9203-20020 ml
P9203-40040 ml

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